Penerapan Analisis HPLC pada Rotary Evaporator

Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) disebut juga kromatografi cair tekanan tinggi, kromatografi cair kecepatan tinggi, kromatografi cair resolusi tinggi, dan kromatografi kolom modern. Ini adalah teknologi pemisahan analitis yang efisien dan cepat yang berkembang pesat pada tahun 1970-an, dan merupakan sarana penting dalam pengujian pemisahan modern.

Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) menggunakan cairan sebagai fase gerak, dan mengadopsi sistem infus tekanan tinggi untuk memompa fase gerak seperti pelarut tunggal dengan polaritas berbeda atau campuran pelarut dan larutan buffer dengan proporsi berbeda ke dalam kolom kromatografi dengan fase diam. Setelah komponen-komponen dalam kolom dipisahkan, mereka masuk ke detektor untuk dideteksi, sehingga dapat dilakukan analisis sampel.

Mekanisme pemisahan kromatografi cair kinerja tinggi sama dengan kromatografi kolom konvensional, namun pengemasannya lebih halus dan perlu didorong oleh pompa bertekanan tinggi, yang memiliki efisiensi kolom tinggi dan kecepatan analisis yang cepat. Berbeda dengan kromatografi gas, fase gerak dalam kromatografi cair juga berpartisipasi dalam proses pemisahan komponen, dan komposisi, proporsi, dan nilai pH dapat diatur secara fleksibel, dengan berbagai mode pemisahan. Dalam prakteknya, nilai retensi dan selektivitas sampel dalam kolom kromatografi diatur dengan mengubah komposisi fase gerak, sehingga sampel yang berbeda dapat dipisahkan.

 

Komponen analisis HPLC

 

Kolom: Kolom merupakan komponen inti sistem HPLC yang digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam sampel. Kolom pemisahan yang umum mencakup kolom fase balik, kolom penukar ion, kolom filtrasi gel, dll., dan pemilihannya bergantung pada sifat senyawa yang akan dipisahkan dan tujuan analisis.

Fase Seluler: Fase gerak adalah kombinasi pelarut yang digunakan dalam HPLC untuk melewatkan sampel melalui kolom pemisahan. Fase gerak biasanya terdiri dari campuran pelarut, dapat berupa pelarut tunggal atau campuran beberapa pelarut dengan perbandingan tertentu. Memilih aliran yang tepat sangat penting untuk efek pemisahan.

Pompa: Pompa digunakan untuk menyediakan fase gerak dan mendorongnya melalui kolom pemisah pada tekanan tertentu. Pompa umum termasuk pompa tekanan konstan dan pompa gradien. Pompa gradien dapat mewujudkan perubahan komposisi fase gerak linier atau nonlinier, sehingga memperoleh efek pemisahan yang lebih baik.

Penyuntik: Injektor digunakan untuk memasukkan sampel yang akan dianalisis ke dalam sistem HPLC. Sampler dapat berupa jarum suntik yang dioperasikan secara manual atau sampler otomatis. Mereka biasanya memiliki karakteristik volume yang akurat dan kemampuan pengulangan yang baik untuk memastikan injeksi sampel yang akurat.

Oven Kolom: Oven kolom digunakan untuk mengontrol suhu kolom pemisahan. Dengan mengontrol suhu, koefisien distribusi dan kecepatan pemisahan sampel dalam kolom dapat diubah, sehingga mengoptimalkan efek pemisahan.

Detektor: Detektor digunakan untuk mendeteksi senyawa yang dipisahkan dan menghasilkan sinyal listrik yang berkaitan dengan konsentrasinya. Detektor umum termasuk detektor serapan ultraviolet-tampak, detektor fluoresensi, dan detektor elektrokimia. Pemilihan detektor bergantung pada karakteristik senyawa yang akan dianalisis dan persyaratan sensitivitas deteksi.

Sistem Akuisisi Data: Sistem akuisisi data digunakan untuk menerima, merekam dan menganalisis sinyal yang dikeluarkan oleh detektor. Ini dapat mengubah sinyal yang terdeteksi menjadi parameter seperti area puncak dan waktu retensi, serta memberikan analisis dan interpretasi hasil.

 

Setelah pelarut dihilangkanpenguap putar, sampel yang diperoleh biasanya pekat atau padat. Jika ingin menganalisis atau mendeteksi lebih lanjut senyawa-senyawa dalam sampel, Anda dapat menganalisisnya dengan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC).

Langkah-langkah umum untuk menganalisis sampel setelah evaporasi putar dengan HPLC

 

1. Pembubaran sampel: larutkan sampel setelah penguapan berputar dalam pelarut yang sesuai. Kelarutan bahan yang akan dianalisis dan persyaratan kondisi analisis HPLC harus diperhitungkan ketika memilih pelarut.

2. Pembuatan larutan standar: Jika diperlukan analisis kuantitatif, larutan standar senyawa yang akan diuji dapat disiapkan untuk selanjutnya koreksi dan penghitungan hasil analisis.

3. Lakukan analisis HPLC: masukkan sampel ke dalam sistem HPLC dan siapkan kolom pemisahan, fase gerak, dan detektor yang sesuai. Sesuai dengan tujuan analisis, pilih metode dan parameter yang sesuai, seperti laju aliran, suhu dan program gradien.

4. Pengumpulan dan analisis data: kromatogram sampel dikumpulkan dengan sistem HPLC, dan senyawa target diukur atau diidentifikasi berdasarkan luas puncak, waktu retensi, atau parameter terkait lainnya. Metode kurva standar dan metode standar internal dapat digunakan untuk analisis kuantitatif.

5. Interpretasi Hasil: Berdasarkan hasil analisis, senyawa dalam sampel dievaluasi secara kualitatif dan kuantitatif. Sesuai kebutuhan, Anda dapat menghasilkan laporan atau mencatat hasil analisis.

 

Penerapan rotovap dalam analisis HPLC memiliki dua arti praktis

 

• Konsentrasi sampel: Dalam beberapa kasus, konsentrasi sampel yang akan dianalisis mungkin terlalu rendah, sehingga rotary evaporator kimia dapat digunakan untuk memekatkan sampel guna meningkatkan sensitivitas deteksi analit dalam HPLC.
• Penghapusan pelarut: Pada beberapa sampel, pelarut dapat mengganggu analisis HPLC, sehingga pelarut dalam sampel perlu dihilangkan atau diganti dengan pelarut yang sesuai untuk HPLC. Rotary evaporator laboratorium dapat membantu menghilangkan pelarut dan mengubah sampel menjadi bentuk yang sesuai untuk analisis HPLC.

 

Analisis HPLC danpenguap putaradalah dua teknik yang umum digunakan dalam analisis kimia, dan keduanya memiliki beberapa perbedaan dan hubungan dalam prinsip dan penerapannya.

 

Perbedaan

 

Prinsip: HPLC didasarkan pada prinsip kromatografi cair, dan pemisahan serta analisis kuantitatif diwujudkan melalui interaksi antara fase diam (kolom) dan fase gerak (pelarut). Evaporator menggunakan prinsip pemanasan dan putaran untuk menguapkan sampel cair dengan cepat dan menghilangkan pelarut, sehingga dapat memusatkan sampel atau mengubah lingkungan pelarut sampel.

Bidang aplikasi: HPLC banyak digunakan dalam bidang kimia, farmasi, lingkungan dan bidang lainnya, dan dapat digunakan untuk pemisahan, identifikasi dan analisis kuantitatif senyawa dalam campuran kompleks; Rotary evaporasi terutama digunakan dalam proses konsentrasi sampel, penghilangan pelarut dan persiapan sampel, dan biasanya digunakan dalam sintesis organik, ekstraksi produk alami, persiapan sampel dan bidang lainnya.

Kecepatan analisis: Analisis HPLC biasanya memerlukan waktu lama untuk memisahkan dan mendeteksi sampel, yang mungkin memerlukan waktu beberapa menit hingga beberapa jam; Unit evaporator putar vakum dapat menguapkan sampel cairan dengan cepat dalam waktu singkat, biasanya hanya membutuhkan waktu beberapa menit.

 

Menghubung

 

Perawatan sampel: Peralatan rotary evaporator sering digunakan untuk memekatkan sampel atau menghilangkan pelarut selama persiapan sampel agar sampel cocok untuk metode analisis lebih lanjut, seperti HPLC. Efek dan keakuratan analisis HPLC dapat ditingkatkan dengan memekatkan sampel dan menghilangkan pelarut dengan menggunakan penguap putar.

Pemilihan pelarut: Dalam analisis HPLC, pemilihan pelarut sangat penting untuk efek pemisahan; Itupenguap putardapat membantu menghilangkan pelarut dari sampel dan mengubah sampel menjadi bentuk yang sesuai untuk analisis HPLC. Oleh karena itu, rotary evaporator dapat memberikan kondisi pelarut yang memuaskan untuk analisis HPLC.

 

Kami menyediakan rotovap pengangkat manual dan rotovap pengangkat elektrik, silahkan menghubungi kamisales@achievechem.comuntuk menyesuaikan mesin evaporator putar Anda sendiri.