Kromatografi kolom konvensional
2. Kolom Kromatografi (Jenis Rotasi)
3. Kolom Kromatografi (Manual)
*** Daftar harga untuk seluruh di atas, tanyakan kami untuk mendapatkan
Deskripsi
Parameter teknis
Kromatografi kolom konvensionalMemanfaatkan perbedaan dalam rasio distribusi zat yang berbeda antara fase stasioner dan fase gerak, atau kapasitas retensi yang berbeda dari fase tetap relatif terhadap zat yang berbeda, untuk mencapai pemisahan zat. Ketika campuran mengalir melalui kolom kromatografi dengan fase gerak, ia akan berinteraksi dengan fase diam di kolom (seperti pembubaran, adsorpsi, dll.). Karena perbedaan sifat fisik dan kimia dan struktur masing -masing komponen dalam campuran, besarnya dan kekuatan interaksi mereka dengan fase stasioner juga bervariasi. Di bawah kekuatan pendorong yang sama, waktu retensi dari masing -masing komponen dalam fase stasioner berbeda, sehingga komponen dalam campuran mengalir keluar dari kolom dalam urutan tertentu, mencapai pemisahan.
Parameter
Deteksi residu pestisida
 |
 |
 |
 |
Kami sering mengatakan ituKromatografi kolom konvensionalsebenarnya pemisahan kromatografi kolom, juga dikenal sebagai kromatografi kolom. Ini pertama kali ditemukan dan digunakan oleh para ilmuwan Rusia pada tahun 1903. Ini menghancurkan larutan pigmen tanaman menjadi bubuk kalsium karbonat dan menemukan pita warna yang berbeda pada bubuk kalsium karbonat dari atas ke bawah. Dengan memisahkan dan mengekstraksi pita warna yang berbeda, klorofil yang relatif murni, lutein, dll. Diperoleh.
After a hundred years of development, this method has become relatively mature, and the stationary phase has also evolved from a single calcium carbonate powder to alumina (which can be divided into acidic, neutral, alkaline), silica gel, activated carbon, etc. Among them, silica gel is the most commonly used in major laboratories, generally divided into normal phase silica gel and reverse phase silica gel!
Fase stasioner (silika gel) umumnya perlu dimurnikan dan diaktifkan, dan ukuran partikel harus seragam. Secara teori, semakin kecil ukuran partikel dan semakin besar luas permukaan per satuan massa, semakin tinggi kapasitas adsorpsi dan semakin baik efek pemisahan.
Namun, dalam penggunaan praktis, ketika partikel fase tetap terlalu kecil, seringkali ada dua situasi: satu adalah bahwa mereka lebih ringan dan mudah mengapung di udara (silika gel tidak dapat terdegradasi oleh tubuh manusia, dan semakin halus, semakin beracun); Kedua, partikel kecil juga dapat menyebabkan celah kecil antara partikel, menghasilkan laju aliran pelarut yang lambat dan konsumsi waktu; Mengambil silikon sebagai contoh, ukuran silikon yang digunakan secara komersial saat ini adalah 200-300 mesh.
Dalam hal metode lewat kolom, selain peralatan analisis otomatis seperti persiapan sirkulasi ke depan, persiapan fase cair yang efisien, dan mesin yang lewat kolom yang disebutkan sebelumnya, lewat kolom manual terutama dibagi menjadi tiga jenis: lewat kolom tekanan atmosfer, lewat kolom depresi, dan kolom tekan yang lewat.
Di antara mereka, depresurisasi melalui kolom menghasilkan efisiensi adsorpsi yang buruk karena laju aliran cepat eluen, yang menyebabkan hilangnya sebagian besar jumlah baki dan efisiensi pemisahan yang buruk. Ini cocok untuk memisahkan sampel dengan pelat TLC yang relatif terbuka, terutama untuk sampel dengan hanya satu pengotor polar besar dalam produk; Sebagian besar waktunya dihabiskan untuk pra-perawatan senyawa, menghilangkan beberapa kotoran sebelum pemurnian yang cermat. Perlu dicatat bahwa penguapan pelarut yang disebabkan oleh tekanan negatif selama penggunaan dapat menyebabkan kondensasi sejumlah besar tetesan air pada permukaan luar kolom. Senyawa yang sensitif terhadap air tidak boleh mudah dicoba.
Passing kolom tekanan atmosfer adalah metode pemisahan yang paling efektif di antara ketiganya, tetapi karena pelarut sering bergerak terlalu lambat, bahkan efek pemisahan terbaik dapat mempengaruhi efisiensi. Oleh karena itu, tekanan biasanya diterapkan pada saat ini, yang disebut kolom bertekanan; Tetapi tekanan seharusnya tidak terlalu tinggi. Secara umum, bola rantai ganda digunakan untuk operasi manual, dan pompa ikan digunakan untuk operasi otomatis. Keduanya dapat dimodifikasi seperti yang ditunjukkan pada gambar.
Proses penyeberangan kolom konvensional:
Pekerjaan persiapan harus dilakukan dengan baik:
Saat memilih kolom, amati apakah ada papan pengamplasan. Untuk kolom tanpa papan pengamplasan, ingatlah untuk mengisi bagian bawah dengan beberapa kapas. Kapas tidak boleh terlalu tebal atau terlalu tipis, asalkan dapat menghalangi silikon dari lepas. (Blogger langsung membongkar gantungan pakaian dan menggunakannya untuk memasukkan kapas ke outlet di steker)
Siapkan eluen polaritas minimum, lampu UV (direkomendasikan untuk personel laboratorium, genggam, siap untuk mengambil foto kapan saja), peralatan bertekanan, dan rak tabung tese seperlunya!
Pilih kolom yang sesuai, tambahkan gel silikon, rendam gel silikon, dan ratakan
PemilihanKromatografi kolom konvensionalsangat penting, dan ukurannya harus dihitung berdasarkan jumlah produk, yang umumnya dapat dibagi menjadi:
Beberapa miligram kolom (pilihan akhir untuk sintesis total);
Satu kolom dari beberapa puluh miligram (substrat ekspansi metodologis);
500 miligram hingga 1 gram kolom (menggunakan metodologi sebagai bahan baku);
Pilar sekitar 5g dan skala yang lebih besar.
Rasio yang paling umum dari diameter kolom dengan tinggi di laboratorium umumnya antara 1: 2.5 dan 1:15. Jumlah gel silika yang digunakan sebagai fase stasioner selama pemuatan sampel adalah sekitar 20 hingga 40 kali lipat dari sampel. Standar untuk memilih kolom harus didasarkan pada situasi pendakian pelat TLC dari sampel Anda. Jika ada banyak kotoran dalam jarak dekat, cobalah untuk memilih kolom yang lebih besar sebanyak mungkin, sehingga sampel Anda dapat ditutupi dengan lapisan tipis kecil (ketebalan yang disarankan di bawah 5mm). Jika kotorannya jauh, ketebalan ini secara alami dapat ditingkatkan, tetapi tidak disarankan bahwa ketebalan sampel Anda melebihi 2cm, kecuali jika produknya hanya dicuci.
Banyak orang membuat kesalahan dengan berpikir bahwa menambahkan lebih banyak silikon, bahkan jika itu lebih tebal pada sampel saya, dapatkah itu dipisahkan dengan baik? Jawaban ini negatif!
Alasannya adalah bahwa orang -orang ini tidak pernah berpikir bahwa sampel di bawah dan di atas tidak berjalan pada baris yang sama, sehingga mereka hanya bisa mendapatkan beberapa yang murni, yang sebagian besar disilangkan, belum lagi yang tidak murni, membuang -buang waktu dan pelarut!
Itu juga mengapa sampel membutuhkan penipisan!
Setelah memilih kolom, menambahkan silikon dapat dilakukan melalui corong makan. Pada saat yang sama, pastikan untuk memakai topeng dan beroperasi di tudung asap. Alasan untuk ini tidak akan diuraikan oleh blogger (silicosis).
Adapun infiltrasi gel silika, proses yang disarankan adalah: pertama, tempatkan kolom gel silika dengan gel silika yang dipasang secara vertikal, ratakan permukaan gel silika dengan tangan Anda, sambungkan bagian bawah kolom gel silika ke pompa air, pompa silika gel, dan kemudian tuangkan ke dalam eluen gel silika dari atas. Ketika eluen akan bocor, tutup katup penutup untuk mencegah pelarut dipompa ke pompa air.
Kemudian, di bawah tekanan, gel silikon dapat direndam secara seragam dengan menyiram tujuh atau delapan volume kolom dengan jumlah terkecil dari agen pengembangan.
Contoh di atas
Pengambilan sampel dibagi menjadi pengambilan sampel basah dan pengambilan sampel kering.
(1) Pengambilan sampel basah.
Metode yang disarankan adalah menggunakan pipet dengan ujung karet untuk mengisap sampel, dekat dengan bagian atas gel silikon, secara perlahan dan merata meneteskan sampel sampai menutupi lapisan, kemudian berhenti menambahkan sampel dan menerapkan beberapa tekanan untuk membenamkan zat berminyak ke dalam lapisan gel silikon; Redam zat berminyak ke dalam lapisan silikon dan ulangi proses ini beberapa kali sampai semua sampel dimuat!
Beberapa siswa baru mungkin penasaran mengapa operasi ini dilakukan alih -alih melapisi oli proses basah seperti zat sekaligus?
Faktanya, operasi ini dapat mengurangi ketinggian efektif lapisan sampel. Pada titik ini, kromatografi kolom telah dimulai, dan sampel selanjutnya seperti pelarut yang mendorong sampel sebelumnya ke adsorb dan desorb dalam silika gel.
(2) Adapun pengambilan sampel kering.
Kecuali benar -benar diperlukan, itu tidak disarankan. Sampel padat lebih disarankan untuk dipukuli atau dikristalisasi. "Metode yang tidak bermoral, etil asetat vs air, osilasi ultrasonik membantu kristalisasi minyak mendidih tinggi" dan "berbagi metode rekristalisasi laboratorium" direkomendasikan.
Pengambilan sampel kering umumnya membawa dua masalah; Di satu sisi, selama proses pencampuran sampel, kemungkinan reaksi antara sampel dan gel silika meningkat karena kebutuhan untuk menaikkan suhu untuk penguapan putar; Di sisi lain, pemuatan kering berarti bahwa adsorben akan dimasukkan ke dalam lapisan sampel, meningkatkan ketinggian lapisan sampel atau ukuran kolom, membutuhkan lebih banyak waktu dan lebih banyak pelarut.
Jika tidak ada pilihan lain, cukup tuangkan bubuk yang diserap perlahan ke dalam kolom untuk memuat, dengan beberapa persyaratan yang mirip dengan metode basah.
Tambahkan natrium sulfat anhidrat atau pasir kuarsa
Untuk menghindari mempengaruhi lapisan sampel selama penambahan eluen, menyebabkan ketidakrataan, deformasi, dan mempengaruhi efisiensi pemisahan, lapisan natrium sulfat anhidrat atau pasir kuarsa umumnya diletakkan di atas lapisan sampel.
Insinyur kami secara pribadi lebih suka meletakkan natrium sulfat anhidrat karena juga memiliki fungsi pengeringan dan ramah terhadap pelarut seperti diklorometana, yang rentan terhadap volatilisasi, penyerapan panas, dan kondensasi!
Elusi gradien, pengambilan sampel dan koleksi
Setelah memuat, pertama bilas kolom dengan pelarut polar kecil (pelarut yang tidak akan memungkinkan produk untuk melewati) untuk volume kolom 2-3 (satu volume kolom didefinisikan sebagai volume fase gerak yang mengalir masuk dan keluar) untuk memastikan keseragaman, dan kemudian memilih proporsi untuk elusi.
Bagaimana cara memilih eluen yang melewati kolom?
Rasio eluen adalah rasio ketika produk Anda mencapai nilai RF sekitar 0. 2 pada pelat TLC
Ini adalah pengalaman mencuci kolom yang telah saya baca banyak buku dan dibagikan, dan proses sebenarnya juga sangat mirip. Secara pribadi, saya lebih suka mengurangi gradien dua kali.
Misalnya, jika pelarut untuk pendakian plat TLC adalah pe/ea =2: 1, blogger lebih cenderung memulai elusi gradien dari pe/ea =4: 1 dan berakhir pada pe/ea =2: 1, umumnya menghasilkan hasil yang lebih baik.
Ada juga teknik saat mengumpulkan eluen. Pertama -tama Anda dapat memilih tabung reaksi yang lebih besar untuk menerimanya, dan ketika TLC mendekati titik target, beralih ke tabung reaksi yang lebih kecil. Ini dapat mengurangi kemungkinan menerima lebih banyak dan menghindari kotoran.
Jika Anda menghadapi situasi di mana titik pengotor dan titik produk berdekatan, terutama mereka yang memiliki fluoresensi lemah, ingatlah untuk tidak memberikan tekanan. Sebagai gantinya, pilih untuk melewati kolom di bawah tekanan normal, dan ubah tabung setiap kali setengah atau kurang tabung terhubung, yang juga dapat meningkatkan probabilitas pemurnian.
Ingatlah untuk tidak menangani pilar secara tepat waktu!
Banyak orang memiliki kebiasaan mengasumsikan bahwa kolom telah dilewati dan dikeringkan ketika tidak ada produk dalam satu atau dua tabung setelah TLC pada tahap selanjutnya.
Saya hanya menyadari bahwa hasilnya terlalu rendah ketika saya menghitungnya, atau ketika saya pergi untuk membuat spektrum, saya menemukan bahwa spektrum itu salah dan melewatkan titik yang salah. Saya sangat menyesalinya.
Jadi disarankan agar Anda tidak terburu -buru memproses kolom setelah menyelesaikan titik yang diinginkan. Sebaliknya, lakukan resonansi magnetik nuklir agar sesuai dengan hasil sebelum diproses.
Jika Anda sibuk atau terburu -buru untuk memurnikan senyawa lain dengan iniKromatografi kolom konvensional, disarankan untuk membilas dengan pelarut campuran jinak polaritas tinggi dan meninggalkan bagian eluen ini secara terpisah untuk hasil identifikasi.
Tag populer: Kromatografi kolom konvensional, pabrikan kromatografi kolom konvensional, pemasok, pabrik, pabrik
Sepasang
Kolom kromatografi kecilBerikutnya
Kromatografi Kolom KapilerKirim permintaan
